مطالعه اثر codon usage سلولهای مخمر پیکیا پاستوریس بر میزان بیان ژن کدکنندهfsh ماهی

هورمون fsh ماهی عضوی از خانواده گنادوتروپین ها است که از غده هیپوفیز ماهی ترشح می شود. ساختمان این هورمون از دو زیرواحد ? و ? تشکیل شده است که به صورت غیرکووالان به یکدیگر متصل شده اند. این هورمون در تنظیم فرآیندهای ضروری تولیدمثل مانند گامتوژنز و رشد فولیکولار در ماهی نقش دارد. از مزایای تولید نوترکیب هورمون fsh می توان به اطمینان از عدم وجود آلودگی با سایر هورمون های گلیکوپروتئینی هیپوفیز و همچنین خالص سازی آسانتر اشاره کرد. در این مطالعه از پیکیا پاستوریس به عنوان سیستم بیانی، برای تولید هورمون fsh ماهی استفاده شد. بدین منظور کدون های توالی زنجیره بتای هورمون fsh ماهی، با توجه به codon usage مخمر پیکیا پاستوریس، بهینه شد. از روی rna استخراج شده از غده هیپوفیز، سنتز cdna صورت گرفته و سپس از روی cdna توالی زنجیره آلفا به وسیله pcr تکثیر شد. هر کدام از زیرواحدهای آلفا و بتا به صورت جداگانه درون وکتور بیانی ppic9 کلون شدند. در ادامه زیرواحد بتا به همراه توالی پروموتر و ختم رونویسی وکتور ppic9، به وسیله پرایمرهای طراحی شده بدین منظور، تکثیر و به درون وکتور ppic9 حاوی زنجیره آلفا وارد شد. سپس وکتور حاوی هر دو زیرواحد، خطی و درون ژنوم مخمر درج شد. در نهایت بیان هورمون fsh ماهی توسط تکنیک های sds-page و وسترن بلات تایید شد.